Práctica 5: Waaler Rose

OBJETIVO

Detección cualitativa y semicuantitativa de FR en suero humano.

SIGNIFICADO CLINICO

Los factores reumatoides son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fracción Fc de las inmunoglobulinas G. Su principal interés clínico radica en el diagnóstico de la artritis reumatoide (RA)

REACTIVOS

·         Waaler Rose: Suspensión hematíes estabilizados de oveja y sensibilizados con IgG de conejo anti-hematie de oveja, pH, 8,2 más un conservante

·         Control + (Tapón rojo): Suero humano con una concentración de FR > 30 Ul/mL con un conservante

·         Control – (Tapón azul):Suero animal y un conservante

MATERIAL ADICIONAL

·         Agitador vortex

·         Pipetas de 50 μL

·         Tarjeta

MUESTRA

·         Suero fresco.

Hay que tener en cuenta que es estable 8 días a 2-8ºC o 3 meses a 20ºC

PROCEDIMIENTO

MÉTODO CUALITATIVO

Atemperamos los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.

Seguidamente depositamos 50 μL de la muestra y una gota del  control Positivo en un círculo del porta y una gota del Negativo sobre otro círculo distinto del porta.

Posteriormente mezclamos el reactivo de Waaler- Rose con el agitador vortex y depositamos 50 μL junto a cada una de las gotas anteriores.

Mezclamos las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. (Para cada muestra se emplea un palillo diferente)

Una vez mezclado situamos el portar sobre una superficie lisa y plana durante 2 minutos e inmediatamente después, inclinamos el porta unos 45º de la horizontal y lo dejamos nuevamente en reposo durante 1 minuto. Se recomienda no excederse del tiempo ya que puede generar falsos positivos.

 

MÉTODO SEMICUANTITATIVO

Depositamos 50 μL de SSF a los 6 pocillos. En el primero echamos 50 μL de muestra con factor reumatoide, diluimos y pasamos 50 μL al segundo pocillo y así sucesivamente. Una vez diluido añadimos una gota de waaler rose a los 6 pocillos y mezclamos con un palillo diferente en cada pocillo.

Situamos la plantilla en una superficie lisa y plana durante 2 minutos e inmediatamente después inclinamos la plantilla a 45º y lo volvemos a dejar en reposo durante 2 minutos