Práctica 2: Rosa de Bengala

OBJETIVO

Determinar cualitativamente anticuerpos anti-brucella 

REACTIVOS

·         Rosa de Bengala

·         Control +

·         Control -

 

MATERIAL

·         Pipetas de 50 µL

·         Micropipetas

·         Suero problema

·         Tarjetas mezcladoras

·         Palillos para mezclar

·         Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 80-100 r.p.m.

·         Agitador vórtex

MUESTRA

·         Suspensión bacteriana

PROCEDIMIENTO

Método cualitativo

1.       Atemperamos los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas

2.       Depositamos 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre círculos distintos de un porta

3.       Mezclamos el reactivo de R. de Bengala vigorosamente o con el agitador vortex antes de usar

4.       Depositamos 50 µL junto a cada una de las gotas anteriores

5.       Mezclamos las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Empleamos palillos distintos para cada muestra

6.       Situamos el porta sobre un agitador rotatorio a 80 – 100 r.p.m. durante 4 minutos. El exceso de tiempo de agitación puede originar la aparición de falsos positivos

Método semicuantitativo

·         Realizamos diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L

·         Procedemos para cada dilución, como en la prueba cualitativa