Práctica 3: FR látex

OBJETIVO

Detección cualitativa y semicuantitativa de factores reumatoides (FR) en suero humano

MATERIAL

·         Pipetas automáticas

·         Agitador mecánico

·         Vórtex

REACTIVOS

·         Látex.

·         Control +

·         Control -

MUESTRA

·         Suero fresco sin restos de fibrina, ni hemolizadas o lipémicas.

PROCEDIMIENTO

Método cualitativo

1.       Atemperamos los reactivos y las muestras a tª ambiente ya que la sensibilidad del ensayo disminuye a tª bajas

2.       Depositamos 50µl de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles + y -, sobre círculos distintos de un porta

3.       Mezclamos el reactivo de FR- Látex vigorosamente o con el agitador vórtex antes de usar. Depositar una gota junto a cada una de las gotas anteriores

4.       Mezclamos las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Empleamos palillos distintos para cada muestra

5.       Situamos el porta sobre un agitar mecánico y agitar durante 2 minutos. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos

Método semicuantitativo

1.       Colocamos una gota de suero salino fisiológico en los pocillos 1, 2, 3, 4, 5 y 6.

2.       Seguidamente, colocamos 50µl de muestra en el pocillo 1.

3.       Mezclamos el pocillo 1 y de ahí cogemos 50µl para pasarlos al siguiente pocillo. Así hasta el pocillo número 6.

4.       Añadimos 1 gota de PCR-látex a cada pozo.

5.       Movemos para facilitar la reacción de aglutinación.

6.       Comprobamos según el factor de dilución el título; en este caso título 4.